<html xmlns:v="urn:schemas-microsoft-com:vml" xmlns:o="urn:schemas-microsoft-com:office:office" xmlns:w="urn:schemas-microsoft-com:office:word" xmlns:m="http://schemas.microsoft.com/office/2004/12/omml" xmlns="http://www.w3.org/TR/REC-html40"><head><meta http-equiv=Content-Type content="text/html; charset=utf-8"><meta name=Generator content="Microsoft Word 14 (filtered medium)"><style><!--
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al style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><b><span lang=EN-GB style='color:black'>From: </span></b><span lang=EN-GB style='color:black'>William McLaren <<a href="mailto:wm2@ebi.ac.uk">wm2@ebi.ac.uk</a>><br><b>Date: </b>Tuesday, 5 December 2017 at 12:23<br><b>To: </b>Alessandro Vullo <<a href="mailto:avullo@ebi.ac.uk">avullo@ebi.ac.uk</a>>, Ensembl developers list <<a href="mailto:dev@ensembl.org">dev@ensembl.org</a>>, Luke Goodsell <<a href="mailto:l.goodsell@achillestx.com">l.goodsell@achillestx.com</a>><br><b>Subject: </b>Re: [ensembl-dev] GRCh37 Protein sequence has asterisks</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>VEP can do this for you with the ProteinSeqs plugin [1]. I did not recommend it initially as I supposed you might be extracting sequences genome-wide.</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'> </span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>The plugin generates two files, reference.fa and mutated.fa, containing one mutated sequence *per variant*. The sequences should be accurate WRT to the modifications made via the BAM files. I can’t say from experience how well this plugin will perform on a genome-wide analysis; you could expect that the resultant FASTA files would be very large at least.</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'> </span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>The plugin does not currently support outputting cDNAs or CDS, but it would be fairly straightforward to add this functionality to the plugin.</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'> </span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>Note that if you wish to incorporate the effects of multiple variants together, you can look into using VEP’s sister tool Haplosaurus [2]; this can output CDS and protein sequences in its JSON format output.</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p></div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB>Cheers <o:p></o:p></span></p><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB>Will<o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB>[1] <a href="https://github.com/Ensembl/VEP_plugins/blob/release/90/ProteinSeqs.pm">https://github.com/Ensembl/VEP_plugins/blob/release/90/ProteinSeqs.pm</a><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB>[2] <a href="https://github.com/Ensembl/ensembl-vep#haplo">https://github.com/Ensembl/ensembl-vep#haplo</a><o:p></o:p></span></p><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p><p class=airmailon0><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>On 5 December 2017 at 12:05:41 pm, Luke Goodsell (<a href="mailto:l.goodsell@achillestx.com">l.goodsell@achillestx.com</a>) wrote:<o:p></o:p></span></p><blockquote style='margin-top:5.0pt;margin-bottom:5.0pt'><div><div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB>Thanks, Will,<o:p></o:p></span></p><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB>Unfortunately, I cannot find cDNA from RefSeq – their sequences contain UTRs. Is there an easy way to identify the start and stop codons? The longest ORF is not always the correct one, unfortunately.<o:p></o:p></span></p><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB>Incidentally, being able to get the sequences used by VEP is very important for us; we’re trying to construct the new protein sequences that result from variants using consequence information annotated by VEP. We’d very much appreciate the corrected sequences being incorporated into the otherfeatures database as soon as possible. <o:p></o:p></span></p><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='color:black'>Kind regards,</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='color:black'>Luke</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p><div style='border:none;border-top:solid #B5C4DF 1.0pt;padding:3.0pt 0in 0in 0in'><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><b><span lang=EN-GB style='color:black'>From: </span></b><span lang=EN-GB style='color:black'>William McLaren <<a href="mailto:wm2@ebi.ac.uk">wm2@ebi.ac.uk</a>><br><b>Date: </b>Tuesday, 5 December 2017 at 09:15<br><b>To: </b>Luke Goodsell <<a href="mailto:l.goodsell@achillestx.com">l.goodsell@achillestx.com</a>>, Ensembl developers list <<a href="mailto:dev@ensembl.org">dev@ensembl.org</a>>, Alessandro Vullo <<a href="mailto:avullo@ebi.ac.uk">avullo@ebi.ac.uk</a>><br><b>Subject: </b>Re: [ensembl-dev] GRCh37 Protein sequence has asterisks</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>Hi Luke,</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'> </span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>There is no straightforward way to do this via Ensembl at the moment; I’d suggest you download the relevant files from NCBI.</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'> </span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>The BAM files we use are obtained from <a href="https://urldefense.proofpoint.com/v2/url?u=ftp-3A__ftp.ncbi.nlm.nih.gov_refseq_H-5Fsapiens_H-5Fsapiens_GRCh37.p13-5Finterim-5Fannotation_&d=DwMFaQ&c=RoP1YumCXCgaWHvlZYR8PZh8Bv7qIrMUB65eapI_JnE&r=YX0kAMk2drCjzCtidXbkoTthZX500NGH8FGbKdexXA4&m=_zoXa85lN4WTyqxrhgp6zhWPKRBO3jGJhvVJoRcdm4E&s=bB7CosJxtG5ZrBxm7LoHIYZuJJ1LeeFqWSpLqVoQoZI&e=">ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/refseq/H_sapiens/H_sapiens/GRCh37.p13_interim_annotation/</a>; it seems there’s a protein and rna FASTA file in there which may have what you need.</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'> </span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>Otherwise you may find what you need in the parent directory <a href="https://urldefense.proofpoint.com/v2/url?u=ftp-3A__ftp.ncbi.nlm.nih.gov_refseq_H-5Fsapiens_H-5Fsapiens&d=DwMFaQ&c=RoP1YumCXCgaWHvlZYR8PZh8Bv7qIrMUB65eapI_JnE&r=YX0kAMk2drCjzCtidXbkoTthZX500NGH8FGbKdexXA4&m=_zoXa85lN4WTyqxrhgp6zhWPKRBO3jGJhvVJoRcdm4E&s=gLXd0xynfoUvDALiF9K0WSs_LhgxOvLxSLF5ymyP6MM&e=">ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/refseq/H_sapiens/H_sapiens</a>. I’m not familiar with NCBI’s FASTA layout so you’d have to investigate yourself!</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'> </span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>Regards</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'> </span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>Will McLaren</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div id="bloop_customfont"><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>Ensembl Variation</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB> <o:p></o:p></span></p><p class=airmailon00><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>On 4 December 2017 at 5:55:38 pm, Luke Goodsell (<a href="mailto:l.goodsell@achillestx.com">l.goodsell@achillestx.com</a>) wrote:<o:p></o:p></span></p><blockquote style='margin-top:5.0pt;margin-bottom:5.0pt'><div><div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;margin-bottom:12.0pt'><span lang=EN-GB style='font-family:"Helvetica","sans-serif";color:black'>Hi Allessandro,</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;margin-bottom:12.0pt'><span lang=EN-GB style='font-family:"Helvetica","sans-serif";color:black'>Is there a way to extract the BAM-edited sequences? I'd simply like to get FASTA files of the RefSeq cDNA and proteins as used by VEP.</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-family:"Helvetica","sans-serif";color:black'>Kind regards,</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;margin-bottom:12.0pt'><span lang=EN-GB style='font-family:"Helvetica","sans-serif";color:black'>Luke</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;margin-bottom:12.0pt'><span lang=EN-GB style='font-family:"Helvetica","sans-serif";color:black'><br><br><br><br></span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-family:"Helvetica","sans-serif";color:black'>From: Alessandro Vullo</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-family:"Helvetica","sans-serif";color:black'>Sent: Monday, 4 December, 17:44</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB style='font-family:"Helvetica","sans-serif";color:black'>Subject: Re: [ensembl-dev] GRCh37 Protein sequence has asterisks</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;margin-bottom:12.0pt'><span lang=EN-GB style='font-family:"Helvetica","sans-serif";color:black'>To: Ensembl developers list, Luke Goodsell<br><br><br><br></span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;margin-bottom:12.0pt'><span lang=EN-GB style='font-family:"Helvetica","sans-serif";color:black'>Hi Luke, The problem is likely to depend on RefSeq differing from the reference. Are you using VEP and then retrieving the sequence as annotated by it? Quoting the relevant people (VEP): "VEP uses BAMs to correct RefSeqs that differ from the reference, and without those the API can give incorrect translations. This will hopefully be fixed in future when the SeqEdit objects that VEP creates from the BAMs are incorporated directly into the otherfeatures DB." Hope that helps, Alessandro</span><span lang=EN-GB><o:p></o:p></span></p></div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB>This e-mail message contains confidential information intended only for the use of the individual or entity to which it is addressed. If you are not the intended recipient, please do not disseminate, distribute or copy this communication, by e-mail or otherwise. Instead, please notify us immediately by return e-mail and then delete and discard all copies of the e-mail. We have taken all reasonable precautions to check this e-mail and any attachments for viruses, but we cannot accept any liability for any damage sustained as a result of any virus, worm or other malicious software. Achilles Therapeutics Limited (10167668) is registered in England and Wales. The registered office is at 215 Euston Road, London, NW1 2BE, UK. _______________________________________________ <br>Dev mailing list <a href="mailto:Dev@ensembl.org">Dev@ensembl.org</a> <br>Posting guidelines and subscribe/unsubscribe info: <a href="http://lists.ensembl.org/mailman/listinfo/dev">http://lists.ensembl.org/mailman/listinfo/dev</a> <br>Ensembl Blog: <a href="http://www.ensembl.info/">http://www.ensembl.info/</a> <o:p></o:p></span></p></div></div></blockquote></div><p class=MsoNormal style='mso-margin-top-alt:auto;mso-margin-bottom-alt:auto'><span lang=EN-GB>This e-mail message contains confidential information intended only for the use of the individual or entity to which it is addressed. If you are not the intended recipient, please do not disseminate, distribute or copy this communication, by e-mail or otherwise. Instead, please notify us immediately by return e-mail and then delete and discard all copies of the e-mail. We have taken all reasonable precautions to check this e-mail and any attachments for viruses, but we cannot accept any liability for any damage sustained as a result of any virus, worm or other malicious software. Achilles Therapeutics Limited (10167668) is registered in England and Wales. The registered office is at 215 Euston Road, London, NW1 2BE, UK. <o:p></o:p></span></p></div></div></blockquote></div></div><p class=MsoNormal><span lang=EN-GB style='font-size:10.0pt;font-family:"Helvetica","sans-serif"'>This e-mail message contains confidential information intended only for the use of the individual or entity to which it is addressed. If you are not the intended recipient, please do not disseminate, distribute or copy this communication, by e-mail or otherwise. Instead, please notify us immediately by return e-mail and then delete and discard all copies of the e-mail. We have taken all reasonable precautions to check this e-mail and any attachments for viruses, but we cannot accept any liability for any damage sustained as a result of any virus, worm or other malicious software. Achilles Therapeutics Limited (10167668) is registered in England and Wales. The registered office is at 215 Euston Road, London, NW1 2BE, UK. <o:p></o:p></span></p></div></div></blockquote></div></body></html>